Swier, L.J.Y.M. (2010) De substraatbinding aan het Substraat Bindend Domein 2 (SBD2) van de ABC-transporter GlnPQ. Bachelor's Thesis, Chemistry.
|
Text
Chem_BC-2010_L.J.Y.M.Swier.pdf - Published Version Download (1MB) | Preview |
Abstract
Gedurende dit onderzoek is de substraatbinding aan de ATP-bindende cassette (ABC)-transporter GlnPQ bestudeerd. Het doel was om meer inzicht te krijgen in de substraatbinding aan het Substraat Bindend Domein 2 (SBD2) van GlnPQ. Aan de hand van de kristalstructuur van SBD2 is een viertal mutanten geconstrueerd in de bindingssite: D267N, S328L, K373V en D417E. Deze mutanten zijn tot expressie gebracht in E. coli en gezuiverd. De karakteristieken voor substraatbinding zijn bepaald met Differential Scanning Calorimetry en Isothermal Titration Calorimetry. Hierbij werd het wild type SBD2 eiwit als referentie voor de data-analyse gebruikt. De gemeten affiniteiten van de mutanten voor glutamine was veel lager van het wild type. Dit was ook verwacht, omdat er echt gesleuteld is aan de waterstofbruggen en de elektrostatische interacties tussen het substraat en het actieve centrum van SBD2. Het kleinste effect is gemeten bij de D417E mutant. Met deze mutatie is de bindingssite van SBD1 gekopieerd naar SBD2. De K373V mutatie blijkt nog wel glutamine te binden met een redelijke affiniteit. De D267N mutatie heeft echter een groot effect op de substraatbinding. Deze leidt namelijk tot een hogere affiniteit voor glutaminezuur of glutamaat in vergelijking met de affiniteit voor glutamine. Daarnaast leidt de mutatie waarschijnlijk ook tot een reorganisatie in de eiwitstructuur. Er was was helaas geen tijd meer voor metingen aan de S328L mutant.
| Item Type: | Thesis (Bachelor's Thesis) |
|---|---|
| Degree programme: | Chemistry |
| Thesis type: | Bachelor's Thesis |
| Language: | Dutch |
| Date Deposited: | 15 Feb 2018 07:45 |
| Last Modified: | 15 Feb 2018 07:45 |
| URI: | https://fse.studenttheses.ub.rug.nl/id/eprint/9449 |
Actions (login required)
 |
View Item |